タンパク質の存在量およびプロテオフォーム構成は細胞表現型の直接的決定因子であるが、限られた数の試料から個々の細胞でそれらを定量化することは依然として困難である。単一細胞ウエスタンブロッティング（scWB）は、定量的で分子量分解能を備えたタンパク質測定を提供する一方で、ポアソン分布で制限される重力沈降に依存しており、約10^6個の出発細胞を必要とする。さらに、単一細胞のマイクロウェル占有は理論上最大36.8%に制約される。ここでは、所定のscWBマイクロウェルへ個々の細胞を決定論的にロードする、画像誘導型の圧電ピペット分注法としてAutoBlotを導入する。AutoBlotは、標的マイクロウェルに対して約98%の単一細胞占有を達成し、出発細胞数が10,000個以下でも動作させられた。試験した細胞濃度の範囲で、測定された占有はポアソン予測を31〜904倍上回り、同一の分注戦略により決定論的な細胞—ビーズの共ローディングも可能になった。AutoBlotを組織学的に正常な乳腺組織から作製した7種類の患者由来ブレストオルガノイド由来の1,449細胞に適用した。系統に関連する5種類のタンパク質の測定により、ドナー間変動が観察され、生殖細胞系BRCA1および閉経状態に関連する差異が示され、表面マーカーに基づく系統割り当てとサイトケラチンに基づく系統割り当てとの間に不一致が認められた。さらにAutoBlotは、PDOの個々の細胞においてER免疫反応性の種を約66 kDaおよび46 kDaで分解して検出した。これらの結果は、不均一で細胞数が制限された試料に対して、分子量分解能を備えた単一細胞タンパク質解析を拡張する戦略として決定論的な細胞ロードが有効であることを示している。
https://doi.org/10.64898/2026.06.22.733890