本研究は、これまで他のプロトコルで独立に用いられてきた複数の技術モジュールを統合する新規手法MADAM（Monoclonal Anti-dsRNA Antibody-Based Metagenomics）を提案する。MADAMは、モノクローナル抗体を介した二本鎖RNA（dsRNA）濃縮、配列非依存的RT-PCR、Oxford Nanopore Technologies（ONT）によるシーケンシングを組み合わせる。イネいもち病の原因因子であるPyricularia oryzaeに適用したところ、中国雲南省で回収した4つの糸状菌分離株から、ミコウイルスのゲノムを包括的に特定できた。このアプローチは高いウイルスリード回収率（46.9-72.7%）を達成し、7つのファミリーにまたがる18のP. oryzae関連RNAウイルスを同定した。すなわち、Botourmiaviridae、Deltaormycoviridae、Mymonaviridae、Partitiviridae、Polymycoviridae、Splipalmiviridae、Ambiguiviridaeである。17のほぼ完全から完全なウイルスゲノム（1,226-6,085塩基長）を回収し、配列カバレッジは88%から100%の範囲であった。4つの分離株のうち3つで重感染が検出され、顕著な発見として、P. oryzaeで初めて報告されたdeltaormycovirus、Botourmiaviridaeの推定される新規メンバー、さらにpolymycovirusの追加ゲノムセグメントが挙げられる。MADAMは、ポジティブ鎖ssRNA、ネガティブ鎖ssRNA、およびdsRNAウイルスを検出でき、幅広い適用可能性を示した。新規ウイルスの発見と複雑な重感染の解明により、本手法は糸状菌ウイルス学にとって不可欠であり、診断、サーベイランス、ならびに生物学的防除への応用が期待される。最終的にMADAMは、糸状菌ウイルスの多様性に関する理解を前進させ、ミコウイルスの生態および進化のさらなる探究への道を拓く。
https://doi.org/10.64898/2026.05.18.725940