SARS-CoV-2は、nsp12とその補因子であるnsp7およびnsp8から構成される保存的なRNA依存性RNAポリメラーゼ（RdRp）複合体により、RNAゲノムを複製する。多くの抗ウイルス戦略がウイルス酵素や表面タンパク質を直接標的とするのに対し、別のアプローチとして、病原体自身に由来する欠陥成分を用いて、不可欠なウイルス分子機械の組み立てまたは機能を攪乱することがある。ここでは、nsp12-nsp7-nsp8複製複合体の構造解析に導かれて、nsp12と結合する能力を保持しつつRNA結合に関して欠陥をもつ切断型のnsp8タンパク質を設計した。RNAプライマー延長が可能な精製nsp12-nsp7-nsp8システムを用いて、選択した切断型nsp8バリアントが、他は機能的な複合体に導入された場合にポリメラーゼ活性を阻害することを示す。これらの結果は、欠陥のあるnsp8バリアントがnsp12に結合し、野生型nsp8の取り込みまたは機能に干渉することで、競合的な機構が成立し、結果として生産的な複製複合体の形成が損なわれることと整合する。この戦略をさらに検討するため、nsp8-nsp12インターフェースに関する構造に基づくin silico解析を用いて相互作用ホットスポットを同定し、それに対応する一塩基（単一アミノ酸）置換をスクリーニングした。再構成ポリメラーゼアッセイでは、いくつかのバリアントが阻害活性の増強を示した。これらの知見は、病原体由来のタンパク質を構造工学的に設計することで、必須のウイルス複製機構に対する優性陰性阻害剤として機能し得るというコンセプト実証を確立するものである。このアプローチは、ウイルス複製複合体内の保存的なタンパク質間相互作用を標的とするタンパク質またはペプチドベースの阻害剤を開発するための枠組みを提供する。
https://doi.org/10.64898/2026.08.30.747997