GCに富む配列はヒトヘルペスウイルスゲノムに多く存在する。GCに富む領域は、Rループと呼ばれる三本鎖のRNA:DNAハイブリッド構造を形成しうる。これらのハイブリッド構造はテロメアや細胞におけるDNA合成の際に重要な生物学的役割を担う一方で、予定外または長時間のRループ形成はDNA損傷とゲノム不安定性を引き起こす。そのため、いくつかのRループ解消機構が存在し、RループのRNA部分を分解するエンドリボヌクレアーゼであるRNaseH1（構成的に発現）およびRNaseH2A（細胞周期により制御される）がそれに含まれる。カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV）の溶菌的複製開始点（OriLyts）には、GCに富む反復的転写産物の産生などを含む、ウイルスDNA複製に必要な複数のシス作用性要素が存在する。これらはT1.4（OriLyt-L）およびkaposin（OriLyt-R）である。我々は先に、RループがOriLytsの両方で形成されること、kaposinリピートの欠失、またはGCに富む含量の低下によりOriLyt-RでのRループ形成が阻害され、初回感染後のゲノム増幅が低下し、潜伏確立に欠陥が生じることを示した。そこで、RループがKSHVの複製に果たす寄与を定義するため、RNaseH1を過剰発現させた。理由は、RNaseH1の過剰がOriLytのRループの両方を解消するはずだからである。しかし、RNaseH1タンパク質量はiSLKおよびBCBL-1の両方の細胞株においてKSHV再活性化後に低下した。共トランスフェクションにより、KSHVのウイルス複製および転写活性化因子であるRTAが、対応するRNA転写産物の量に影響を与えることなく、E3リガーゼドメイン依存的な様式でRNaseH1タンパク質の低下を媒介することを見出した。さらに、RTA抵抗性かつ機能的なRNaseH1を、リシン残基を単独または組合せで部位特異的変異導入することで構築しようと試みたが、これらの構築体はRTAによるタンパク質低下の影響を受け続けた。アミノ末端にタグを付けたRNaseH1ではRTAに対する感受性が低下し、RTAがRNaseH1のN末端をユビキチン化の標的としている可能性が示された。しかし、細胞周期制御型エンドヌクレアーゼであるRNaseH2を過剰発現するとRTA耐性が観察され、RNaseH2がKSHV感染中にRループを効果的に解消するための手段となりうることが示唆された。KSHVはRNaseH1の低下をもたらすタンパク質をコードする唯一のヘルペスウイルスではない。関連するガンマヘルペスウイルスであるEBVおよびMHV-68のRTAホモログを同時発現させても、定常状態のRNaseH1タンパク質量が同様に低下した。我々は、RTAによるRNaseH1分解が、ガンマヘルペスウイルス感染中にRループの持続性を確保するための保存された戦略であると提案し、これらの構造の重要性を強調する。
https://doi.org/10.64898/2026.08.31.748444