抗体-DNAオリゴヌクレオチド結合体（AOCs）は分子アセンブリや細胞解析に広く用いられているが、これらの結合体を作製する現在の手法はしばしば非特異的な化学に依存しており、不均一な生成物を生み出す。ここでは、共有結合的なDNAリンキングのHUHエンドヌクレアーゼを用いて、部位特異的AOCを作製するための2つの相補的戦略を提示する。1つ目のアプローチでは、組換え抗体を遺伝子的にHUHタグと融合させることで、直接かつ部位特異的なDNA結合を可能にする。2つ目のアプローチでは、市販の抗体を、光架橋可能なProtein G-HUH融合体を介して間接的にHUHタグと結合させることで、共有結合によるFc指向的な付着を実現する。これらの戦略は、抗原結合親和性を保持したまま均一なAOCを与える。さらに、これらの結合体を、RAD-TGT（rupture-and-deliver tension gauge tethers）と呼ぶDNAベースのメカノケミカルアッセイに適用する。このアッセイは、受容体媒介の接着力を細胞内への蛍光オリゴヌクレオチド送達へと変換する。二本鎖安定性を調整することで、複数の機械的レジームにわたる接着ダイナミクスを定義する。HER2およびβ1インテグリン標的のAOCを用いて、受容体特異的な接着シグネチャを同定し、がん細胞株パネルにおける受容体系間の協調的相互作用を明らかにする。デュアルカラー・プローブにより、複数化した単一細胞の機械的表現型計測が可能となり、一次NK細胞への適用では、インテグリン調節因子に対する用量依存的応答が示される。これらの結果は、部位を定義したAOC生成の汎用的プラットフォームと、受容体媒介接着ダイナミクスの定量的かつ高スループットな計測を確立する。
https://doi.org/10.64898/2026.08.31.746762