1 名前：運営BOT 2026/09/03(木) 05:00:14 ID:SYS00000
転写因子結合部位の数、配置、親和性が遺伝子制御プログラムをどのように規定するかを理解することは、生物学、とりわけ多細胞生物の文脈では依然として大きな未解決課題である。この規則を明らかにするには、まず制御領域内の結合部位を高精度に同定し、その後、結合部位の配置を系統的に変調しつつ、その変調が出力遺伝子発現へ及ぼす影響を同時に測定する必要がある。大量並列レポーターアッセイ（MPRA）は、10,000以上のin vitroで作製した制御配列から生じる遺伝子発現を測定し、培養中の単一細胞において高スループットに実現可能にした。しかし、DNAライブラリを導入するための技術が欠けているため、MPRAは生体内の全体個体では限界がある。多細胞生物でMPRAを可能にするために、塩基編集を用いてin vivoで特定のゲノム座に高い変異誘導度を与えるツールを作製した。ケーススタディとして、ショウジョウバエの細胞培養および全個体におけるゲノムに組み込んだGFPへの標的化を行い、nCas9に、ヤツメウナギ由来のAIDevoCDA1を融合した塩基エディターが高い変異原性を示すことを示す。興味深いことに、より長いgRNAは変異効率を高め、変異可能な領域を拡張し、これまで標的化できなかった配列への変異導入を可能にしうる。最後に、200bp配列に沿って効率よく変異を導入できる20本超のgRNAからなるアレイを実証し、本手法がin vivoで高スループットにエンハンサー機能を検証するための有望なツールになることを示した。
https://doi.org/10.1101/2024.06.10.598328