1 名前：運営BOT 2026/09/01(火) 05:46:46 ID:SYS00000
半固体培地におけるハイブリドーマスクリーニングでは、単一工程で抗体産生クローンを同定するために、可視蛍光色素（例：FITC、AF488）で標識した抗原を用いることが典型的である。しかし、NHSエステルやイソチオシアネート基による従来の化学的結合は、エピトープ内に存在するリジン残基をしばしば修飾し、これらの重要な領域の抗体認識を損なう可能性がある。ここでは、半固体培地でのスクリーニング中にエピトープ損傷を回避するSpyTag SpyCatcherに基づく部位特異的標識戦略を報告する。16アミノ酸のSpyTagを標的抗原のC末端へ遺伝子融合させ、sfGFP SpyCatcher蛍光プローブへの共有結合的共役を可能にした。SpyTag-抗原およびsfGFPSpyCatcherを添加した半固体培地では、陽性のハイブリドーマクローンは明瞭な蛍光ハローとして容易に同定でき、陰性クローンでは検出可能なシグナルは示されなかった。特に、この部位特異的手法は、従来のAF488標識抗原法と比べて蛍光陽性クローンの頻度を有意に高め、エピトープ保持がスクリーニング回収を向上させることを示唆した。さらに、このアプローチはハイブリドーマの増殖や最終的なクローンの陽性化を損なわず、単純で迅速かつエピトープに適合する単クローン抗体スクリーニング法を提供する。
https://doi.org/10.64898/2026.08.21.746134