TrueLAMPによるLAMPにおけるプライマー駆動の非特異的増幅の抑制

ループ媒介等温増幅（LAMP）は迅速な核酸検出を可能にする一方で、偽陽性の原因となるプライマー駆動の非特異的増幅に対して脆弱である。本研究では、標的依存的な増幅を維持しつつ非特異的増幅を抑制する阻害剤を含む比色定量型のLAMP製剤TrueLAMPを開発した。これらの研究における65のすべてのNTC（ノーテンプレートコントロール）は陰性のままであり、観測された特異度は100%に相当した。モデルとしてSARS–CoV–2を用い、Lambプライマーセットを代表的なベンチマークとすると、TrueLAMPは反応あたり250コピーの検出限界（95%の検出確率）を達成した。エンドポイントの色は長時間のインキュベーション中も安定しており、時間に敏感な読み取りの必要性を低減した。TrueLAMPは、対流オーブン、水浴、温度制御したスマートマグなど、入手しやすい加温デバイスに対応していた。DNA標的を含む追加のプライマー–テンプレート系を用いた2つの外部検証機関での独立評価によっても、非特異的増幅の抑制と配列依存的な標的検出がさらに裏付けられた。以上より、TrueLAMPは等温ワークフローの単純さを保ちながらLAMP検出の信頼性を改善するための実用的な手法であることが示された。

https://doi.org/10.1101/2025.10.23.684253